狂犬N蛋白（NP）標記抗體

狂犬N蛋白（NP）標記抗體N蛋白是保守性一種蛋白，同時也是誘導特異性B細胞和Th細胞反應的良好抗原。GP是誘導機體產生保護性中和抗體的抗原，能刺激機體產生細胞免疫，是狂犬病毒各蛋白中變異較大的一種蛋白，因此G基因是被用來研究狂犬病毒基因工程苗的基因。 鑒于狂犬病毒野毒株和各固定毒株之間變異較大，而N蛋白保守性比較高，因此本研究將我國狂犬病毒獸用疫苗株(Flury LEP株)的N基因用RT-PCR方法進行擴增、測序，并用原核細胞進行了初步表達。對G蛋白進行克隆、測序，以及與其它毒株進行了序列比較。 首先，本研究采用RT-PCR擴增了長度為1353bp的N基因和1575bp的G基因，隨后將它們分別克隆至pET-28a(+)載體中，構建了重組質粒PET-N和PET-G。 其次，對測序的N和G基因利用生物學軟件，與人用疫苗株、當前流行的代表性街毒株及其它固定毒株的同源性進行了對比比較，繪制了進化樹。結果表明，我國現在所用的獸用疫苗株(Flury LEP株)N和G的基因序列與GenBank上已發表的Flury LEP*一致，表明該疫苗株在傳代過程中未發生變異，且與現在我國流行的RV野毒株基因序列同源性較高。同時，對N和G基因的抗原性和親水性指數進行了計算和比較，發現N基因各毒株之間差別很小，而G基因各毒株之間差別較大，尤其是主要抗原位點Ⅲ，LEP333位的精安酸被苷氨酸替代是LEP株與街毒株在該抗原位點的主要區別。 然后將鑒定正確的PET-N轉入BL21細胞，成功表達NP，并通過實驗確定了表達時間和IPTG誘導濃度。 對N和G基因進行序列分析有助于對當前我國使用的獸用疫苗株的免疫保護性進行分析，同時也能為我國RV的流行病學研究提供參考依據。

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